福建農(nóng)林大學園藝學院/茶學福建省普通高校重點實驗室林秋香等，通過測定白毫銀針茶湯干預前后細胞的甘油三脂(TG)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力水平、丙二醛(MDA)含量變化，油紅染色，分析細胞內 SREBP-1c、FAS 和 CPT1A mRNA 表達變化，評價白毫銀針水提取物對非酒精性脂肪肝氧化應激的干預作用，以期闡明其防治非酒精性脂肪肝的作用機制。
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非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指除外酒精和其他明確的損肝因素所致的肝細胞內脂肪過度沉積為主要特征的臨床病理綜合征，與胰島素抵抗和遺傳易感性密切相關的獲得性代謝應激性肝損傷。隨著肥胖及其相關代謝綜合征全球化的流行趨勢，非酒精性脂肪性肝病現(xiàn)已成為歐美等發(fā)達國家和我國富裕地區(qū)慢性肝病的重要病因，普通成人NAFLD患病率10%～30%，其中10%～20%為NASH，后者10年內肝硬化發(fā)生率高達25%。——科普中國
目前，NAFLD的發(fā)病機制被廣為接受的是“二次打擊”學說。該學說認為“第一次打擊”是由胰島素抵抗、肥胖等因素引起的。而啟動“第二次打擊”的因子主要包括氧化應激、脂質過氧化、促炎癥因子、線粒體功能障礙等。
“第二次打擊”理論認為，在脂肪變性的基礎上，以反應氧體系為核心的氧應激、脂質過氧化及炎性細胞因子的作用可導致脂肪變性肝細胞發(fā)生炎癥、壞死和纖維化，使肝臟進一步損害，而抗氧化劑能減小肝臟損傷程度。
據(jù)研究，白茶抗氧化能力在六大茶類中居于前列。因白茶加工工藝只有萎調和干燥，未經(jīng)過劇烈的機械損傷和熱的破壞，自由基含量最低。
重要的是白茶生產(chǎn)過程中，茶多酚雖然氧化，但其緩慢氧化形成的黃酮物質明顯增加，白茶黃酮含量7.32～12.82 mg·g-1，黃酮含量比鮮葉升高 16.2 倍。白茶氨基酸含量是其他五大茶類的1.13～1.25 倍，咖啡堿含量高14%～29%，而茶多酚、黃酮類物質、氨基酸、咖啡堿對茶浸提液抗氧化能力有重要影響。
試驗證明，白毫銀針水提取物能減輕非酒精性脂肪肝模型組肝細胞TG蓄積、降低細胞內MDA含量、升高SOD活性，其機制可能與抑制 SREBP-1c 及其下游的FAS基因表達，減少TG合成，且增強CPT1A 基因表達，加速 TG 分解有關。
各組細胞內 SOD、MDA、TG 含量的變化
A.正常組;B.自然恢復組;C.模型組;D.辛伐他汀組;E.油酸處理 24 h，1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h;F.油酸處理 24 h，0.5 mg·mL-1白毫銀針茶湯處理 24 h;G. 1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h;H. 0.5 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h。
由圖可知，模型組(非酒精性脂肪肝細胞模型)與正常組相比，模型組細胞內超氧化物歧化酶SOD含量顯著降低;茶湯處理組(E、F、G 與H)和辛伐他汀(降血脂藥物)處理組(D)SOD含量顯著高于模型組;茶湯處理組、辛伐他汀組與自然恢復組比較，D、E組SOD含量均顯著高于自然恢復組。
從丙二醛MDA含量來看，模型組細胞(非酒精性脂肪肝細胞模型)是正常組的3倍多;茶湯處理組、辛伐他汀(降血脂藥物)處理組的 MDA 含量均顯著低于模型組;茶湯處理組 E、F、G 和辛伐他汀組 MDA 含量也顯著低于自然恢復組。
模型組細胞(非酒精性脂肪肝細胞模型)甘油三脂TG含量是正常組的5倍多;模型組與茶湯處理組、辛伐他汀(降血脂藥物)處理組相比，D、E、F、G 組 TG 含量均顯著低于模型組;茶湯處理組 E、G 和辛伐他汀組的TG含量均顯著低于自然恢復組。
02
各組細胞油紅 O 染色
A. 0.5 mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h，油酸處理 24 h;B. 1 mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h，油酸處理 24 h;C.油酸處理 24 h，0.5mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h;D.油酸處理 24 h，1 mg·mL-1 白毫銀針處理 24 h;E.辛伐他汀組;F.自然恢復組;G.模型組;H.正常組。
利用倒置顯微鏡觀察油紅染色后的細胞，結果如圖。模型組(G)與其余各處理組相比，細胞內橘紅色脂滴數(shù)量最多，部分出現(xiàn)片狀融合現(xiàn)象;D 組細胞橘紅色脂滴數(shù)量最少。由模型組G 與自然恢復組 F 相比可知，脂肪肝細胞具有自我修復能力，脂滴數(shù)量在一定程度上減少，且脂滴顏色褪去。
03
各組細胞內 SREBP-1c、FAS 和 CPT1A mRNA 表達變化
A.正常組;B.自然恢復;C.模型組;D.辛伐他汀組;E.油酸處理 24 h，1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h;F.油酸處理 24 h，0.5 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h;G. 1 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h;H. 0.5 mg·mL-1 白毫銀針茶湯處理 24 h，油酸處理 24 h。
正常組與模型組相比，模型組 (非酒精性脂肪肝細胞模型)SREBP-1c 表達顯著上調;茶湯處理組(E、F、G 與 H)、辛伐他汀處理組(D)的SREBP-1c 表達顯著下調;辛伐他汀處理組(D)和 E、F、G茶湯處理組 SREBP-1c 表達量均顯著低于自然恢復組(B)。此外，E茶湯處理組 SREBP-1c 表達量顯著低于辛伐他汀(降血脂藥物)處理組(D)。
FAS 表達模式與 SREBP-1c 相似，不同之處在于辛伐他汀處理組(D)和茶湯處理組(E、F、G 與 H)FAS表達量均顯著低于自然恢復組(B);E、G 與 H 茶湯處理組 FAS 表達量均顯著低于辛伐他汀處理組(D)。
CPT1A 表達模式與以上兩個基因基本相反。茶湯處理組(E、F、G、H)和辛伐他汀處理組的 CPT1A 表達均顯著高于模型組;辛伐他汀處理組和 E、G 茶湯處理組 CPT1A 表達顯著高于自然恢復組。
討論
氧化應激與非酒精性脂肪性肝病的發(fā)生密切相關。氧化應激會引起不同程度的肝損傷。
由自由基攻擊細胞膜磷脂分子引發(fā)脂質過氧化反應而產(chǎn)生的 MDA 具有一定的細胞毒性。
同時，肝細胞 MDA 含量常被作為評判細胞內脂質過氧化嚴重程度的重要指標，如肝細胞 MDA 含量上升，則表明發(fā)生了一定程度的脂質過氧化反應，且有可能進一步引發(fā)氧化應激反應。
細胞在油酸的刺激下產(chǎn)生大量的 MDA 等有害物質破壞其完整性，而 SOD 作為氧自由基的清除劑，其活性增強可減弱細胞損傷，從而起到保護細胞的作用。
本研究中，模型組與正常組比較，細胞內 MDA顯著升高，而細胞內 SOD 活力顯著降低;茶湯處理組(E、F、G與H)和辛伐他汀處理組(D)SOD 含量顯著高于模型組，而MDA含量顯著低于模型組，其中E組SOD活性較高，而 MDA 含量最低，且根據(jù)油紅染色圖可知，E組脂滴數(shù)量少?？芍?1 mg·mL-1 白毫銀針水提取物可顯著改善肝臟脂質積累。
在油酸的刺激下，細胞脂肪酸的攝取和合成量超過其分解代謝速度，脂質被儲存在肝細胞中，并可能導致肝細胞積累大量甘油三酯(TG)。積累 TG 的肝細胞內氧自由基增多，當積累量超過肝臟氧化能力時，則加劇脂質積累和細胞代謝紊亂，進而造成細胞損傷。
在NAFLD患者中，肝臟SREBP-1c表達升高。SREBP-1c 是控制肝臟脂質合成的重要轉錄因子，促使肝臟脂肪酸合成增加而消耗減少，導致肝臟內脂質累積。SREBP-1c 可促進下游 FAS 等生脂基因的表達，增強脂肪酸合成，加速 TG 積累，在肝臟 TG 合成中發(fā)揮重要作用。CPT1A 是將脂肪酸從細胞質轉運至線粒體基質的膜轉運蛋白，參與線粒體 β 氧化，加速脂肪酸分解。
本研究中，1 mg·mL-1 白毫銀針水提取物能顯著改善肝臟脂質積累，且作用機制可能是通過抑制脂質合成有關基因 SREBP-1c 和 FAS 的表達，抑制 TG 合成;上調脂肪酸 β 氧化基因 CPT1A，加速 TG 分解，從而緩解脂肪肝細胞模型中 TG 堆積。
參考文獻：林秋香,等：白毫銀針茶水提取物對 LO2 細胞脂質積累的影響及其機理研究
來源：華茶號
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